蛹虫草无性型深层培养液中纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究
[目的]确立蛹拟青霉深层培养液中高纯度、高纤溶活性纤溶酶的分离纯化方法并测定其酶学性质.[方法]采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对蛹拟青霉纤溶酶进行分离.用Lowry法测定蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,SDS-PAGE鉴定其纯度并确定其分子量,IEF法测定其等电点.[结果]研究发现,以蔗糖和豆饼为培养基主要基质时,蛹拟青霉深层培养可以产生至少两种纤溶酶.提纯后的纤溶酶Ⅱ比活力达到800.46 U/mg,总纯化倍数为30.07倍.纤溶酶Ⅱ的相对分子量和等电点分别为32 kD和9.3±0.2.纤溶酶Ⅱ是一种糖蛋白,总含糖量为0.98％ (W/V).该酶可以顺次降解人血纤维蛋白(原)的α、β和γ链.其最适作用pH及温度分别为7.4和41℃.Aprotinine与PMSF对该纤溶酶的活性完全抑制,推测此纤溶酶可能是一种丝氨酸蛋白酶.[结论]单一的高纤溶活性纤溶酶的获得和酶学性质的确定,为该酶开发成为新型溶栓药物提供了理论依据.
蛹拟青霉、纤溶酶、分离纯化、酶学性质
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国家自然科学基金项目31171744;齐齐哈尔大学创新科研项目YJSCX2010-009X
2013-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1787-1795
