嗜热脱氮土壤芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的克隆与重组表达及其酶学性质研究

摘要：

[目的]克隆嗜热脱氮土壤芽孢杆菌中的β-葡萄糖苷酶基因bglB,在E.coli中异源表达,纯化并研究其酶学性质.[方法]利用PCR技术从嗜热脱氮土壤芽孢杆菌的基因组DNA中克隆得到bglB基因,将该基因克隆到表达载体pGEX-2TL上并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对纯化后的β-葡萄糖苷酶的酶学性质及寡聚状态进行分析.[结果]重组表达的β-葡萄糖苷酶最适温度为65℃,最适pH为7.0,能在pH 5-10、60℃下稳定存在4h,并能在较高的离子强度(880 mmol/L K+)下发挥其功能.A13+离子对其有强烈的激活作用,C02+有一定的抑制作用.最适反应条件下该酶比活力为0.043 IU/mg.该酶具有多种寡聚体形式,这些寡聚体均有β-葡萄糖苷酶活性.[结论]获得一个耐热耐盐的中性β-葡萄糖苷酶,为进一步研究β-葡萄糖苷酶的催化作用机理,提高其热稳定性提供一定的帮助.

关键词：β-葡萄糖苷酶、嗜热脱氮土壤芽孢杆菌、重组表达、耐热、耐盐

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资助基金：中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室开放课题SKLMR-20100602

在线出版日期：2013-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：891-900