从植物共生菌宏基因组文库筛选新的生物催化酶基因

摘要：

[目的]通过建立宏基因组文库的高通量保存与基于探针洗脱的多次膜杂交筛选方法,从植物共生菌宏基因组文库筛选具有生物催化潜力的新酶基因.[方法]首先根据滴度将初始文库噬菌体包装颗粒感染到EPI300TM-T1R E.coli,过夜培养后对应保存于96孔板;提取粘粒进行文库的杂交筛选.[结果]描述的洗脱条件可完全去除尼龙膜上与靶DNA结合的探针,并且尼龙膜上的靶DNA至少可用于7次探针杂交,从而明显提高宏基因组文库的筛选效率.[结论]以Enoate reductase (ER)和短链脱氢酶(SDR)的同源基因片段为探针,运用该方法经两轮筛选获得候选单克隆并进行了部分粘粒的测序,发现了新的ER和SDR同源基因,并克隆到相应的全长基因序列用于后续的表达与酶化学研究.

关键词：宏基因组、探针洗脱、生物催化剂、短链脱氢酶、Enoate reductase

所属期刊栏目：39

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30430020;植物化学国家重点实验室基金P2009-ZZ02

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：661-667