拟青霉内切β-1,3(4)-葡聚糖酶基因克隆、表达及重组酶性质

摘要：

采用改造的酿酒酵母表达载体pYES2-GSL构建了拟青霉Paecilomyces sp.FLH30表达cDNA文库,刚果红平板法筛到一内切β-1,3(4)-葡聚糖酶基因(PsBg16A),全长cDNA为1 217 bp,完整开放阅读框(ORF) 951 bp,编码316个氨基酸,属于糖苷水解酶16家族.去信号肽的PsBg16A克隆入表达载体pET28a(+)并在E.coli BL21成功表达,经16℃ 20％乳糖诱导24 h,酶活达482 U/mL.重组PsBg16A可水解大麦葡聚糖、地衣多糖和昆布多糖,显示PsBg16A为典型的β-1,3(4)-葡聚糖酶(EC 3.2.1.6),重组酶最适pH和温度分别为7.0和65℃,对大麦葡聚糖、地衣多糖和昆布多糖的Km分别为3.12、4.86和10.32 g/L.

关键词：拟青霉、β-1、3(4)-葡聚糖酶、基因克隆、表达、性质

所属期刊栏目：38

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1657-1665