pHsh载体对外源基因在E.coli中高效表达的机制探讨

摘要：

pHsh是根据大肠杆菌的热体克反应构建而成的新型表达载体,受δ32调控.正常E.coli 细胞的整个热休克反应持续时间约12 min,而在携带有外源基因的高拷贝pHsh的E.coli细胞中,外源基因却能持续高效表达4-10 h.为探求外源基因高效表达的机制,以一个编码木聚糖酶的外源基因为代表,首先研究了质粒拷贝数对木聚糖酶表达的影响,接着通过Western-blot检测了携带质粒pHsh-xynⅢ和对照组携带pLac-xynⅢ的E.coli细胞在非诱导条件下(30℃)和诱导条件下(30℃→.42 ℃)胞内δ32的差异,最后测定了不同温度下(30℃、37℃、42℃、30℃→42℃)携带质粒(pHsh-xynⅢ)的E.coli细胞内稳定状态下热休克的水平(以木聚糖酶活性表征).研究结果表明外源基因在pHsh中的高效表达是与3个方面密切相关的:pHsh质粒的高拷贝数增加了外源基因的剂量；pHsh的存在使E.coli细胞内δ32的水平较正常E.coli细胞显著增加了,并最终增强了E.coli 的热休克反应；诱导状态下带有pHsh重组质粒的E.coli细胞内稳定状态下的热休克水平明显高于其它温度的水平.

关键词：大肠杆菌、pHsh载体、热休克、δ32、表达

所属期刊栏目：38

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：长江大学博士启动基金801100010112

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1355-1361