绿僵菌微循环产孢基因Pyk的克隆及RNA干扰分析

摘要：

微循环产孢是真菌遭遇逆境时发生的一种产孢机制，具有繁殖快速及抗逆性强等诸多优点。研究绿僵菌的微循环产孢机制并加以利用，对增强该菌在生物防治中的应用效果具有重要的意义。采用绿僵菌基因组数据库与NCBI数据库中同源蛋白比对获得Pyk基因DNA序列；分析Pyk基因结构并设计引物，通过RT-PCR扩增克隆Pyk全长cDNA序列。序列分析显示该基因cDNA全长1 934 bp，开放阅读框长为1 752 bp(GenBank登录号：HQ153828)，编码产物为583个氨基酸的丙酮酸激酶，该酶与子囊菌门中其他真菌具有较高的相似性(57％-77％)。构建Pyk基因的RNAi载体，基因枪转化野生型绿僵菌获得3个突变菌株，RT-PCR证实3个干扰突变菌株中Pyk基因的干扰效率分别为：51％、56％、33％。对突变菌株的微循环产孢模式做了进一步分析，结果显示：与野生菌株相比，突变菌株产生更多的孢子形态类型，菌落周边的白色菌丝也相对较少。

关键词：虫生真菌、微循环产孢、丙酮酸激酶、RNA干扰

所属期刊栏目：38

分类号：Q-37(生物科学的研究方法与技术)

资助基金：生物源农药创制与技术集成及产业化开发项目200903052;211工程项目S-09104

在线出版日期：2011-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：853-859