嗜热厌氧乙醇杆菌调控因子PadhE-1的分离、重组表达及其与adhE基因启动子的结合

摘要：

嗜热厌氧乙醇杆菌发酵是生产纤维素乙醇的有效途径,而嗜热厌氧乙醇杆菌醛/醇脱氢酶(AdhE)是其乙醇代谢途径中的关键酶.以adhE启动子区域的DNA序列(TRRadhE)作为诱饵,通过制备核酸亲和层析柱,利用调控因子与DNA特异性结合的特点,得到调控因子PadhE-1.经过蛋白测序和NCBI数据库的比对,发现其N端序列与Thermoanaerobacter pseudethanolicus 39E的LacI家族转录调控因子(GenBank aceession No.YP_001665770)有90%的同源性.根据同源性设计引物,从嗜热厌氧乙醇杆菌JW200基因组中通过PCR扩增得到调控因子PadhE-1的基因,并克隆到表达载体pET-28a得到重组质粒pET-PadhE.转化大肠杆菌JM109(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+亲和柱纯化,得到重组表达的调控因子PadhE-1.体外凝胶阻滞实验证实PadhE-1能与TRRadhE特异性结合.这将有助于我们了解嗜热厌氧乙醇杆菌的乙醇代谢调控机理.

关键词：嗜热乙醇杆菌JW200、亲和层析、调控因子、凝胶阻滞

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30900008;江苏省高校自然科学重点项目09KJA180003

在线出版日期：2011-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1501-1505