P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

摘要：

为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E.将该质粒电转化至毕赤酵母Pichia pastoris GS115中.进行异源表达.与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40℃温育处理30 min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%.叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51℃,比野生型酶PEL提高了2.81℃,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25℃.通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料.

关键词：扩展青霉脂肪酶、叠加突变、热稳定性

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分类号：TQ925(其他化学工业)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30270033;福建省自然科学基金重点资助项目BOI20001;福建省自然科学基金资助项目C0410009;福建省科技平台建设计划项目2006H0085

在线出版日期：2011-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：161-165