支气管败血波氏杆菌外膜蛋白的提取及其免疫效果的检测

摘要：

本研究以小鼠为实验动物模型,研究支气管败血波氏杆菌的外膜蛋白(OMP)和其中的有效保护抗原成分(OMP68)的免疫原性及免疫保护作用.本研究利用改进的Wooldridge的方法提取了支气管败血波氏杆菌P11和P13的OMP,利用SDS-PAGE比较了2株之间差异,采用Western-blotting进行了分析并确定了P13菌株OMP(P13-OMP)中的有效保护性抗原成分,采用电洗脱方法获的分子量为68 kD的P13-OMP有效保护抗原成分(OMP68),然后制备了油乳剂P13的全菌、P13-OMP和OMP68免疫抗原.抗体动态变化:将清洁级小鼠70只随机分成7组,10只/组,用油乳剂P13的全茵和不同剂量的P13-OMP和OMP68免疫抗原分别免疫,采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体水平并分析抗体动态变化;主动免疫保护试验:将清洁级小鼠80只随机分成8组,10只/组,分别采用制备的油乳剂P13-OMP(OMP25 μg/只)、OMP68(25 μg/只)和P13菌体免疫抗原在免疫10 d后,分别用100 LD50的P11和P13腹腔攻毒,然后统计保护率并分析免疫原所提供的免疫保护力.免疫P13-OMP和OMP68油乳剂抗原后,7 d时,抗体水平开始逐渐上升,42 d时,抗体水平分别达到215.3和214.8,然后逐渐下降,70 d时,抗体水平分别达到29.1和210.2.主动免疫时,P11和P13攻毒的P13-OMP免疫组分别均得到9/10和9/10的保护,OMP68免疫组分别均得到9/10和10/10的保护,而P13全菌免疫组分别得到4/10和6/10保护,对照组全部死亡.P13-OMP和OMP68抗原均具有良好的免疫原性和免疫保护作用,为支气管败血波氏杆菌OMP亚单位疫苗的研制奠定了良好的理论基础.

关键词：支气管败血波氏杆菌、小鼠、外膜蛋白、免疫原性

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分类号：S85;R-3

资助基金：国家自然科学基金30670114,30740077;山东省自然科学基金项目Y2006D09

在线出版日期：2008-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1426-1432