布鲁氏菌入侵相关基因IalB缺失株的构建及生物学特性分析
入侵相关基因(invasion-associated locus B,ialB)的同源基因在布鲁氏菌所属的根瘤菌目中是广泛保守的,但其在布鲁氏菌中的功能研究几乎为空白.根据有限的报道资料,猜测ialB 的功能可能与布鲁氏菌入侵细胞以及适应胞内环境胁迫有关.[目的]探究ialB在布鲁氏菌中的生物学功能,揭示其在布鲁氏菌黏附和入侵细胞以及胞内存活中的作用.[方法]以猪种布鲁氏菌S2株为亲本,运用同源重组的方法构建布鲁氏菌ialB 缺失株△ialB,并通过表达质粒转化的方法构建其回补株C△ialB,比较3种菌株的生长特性、对体外应激的敏感性;通过扫描电镜观察ialB缺失对布鲁氏菌形态的影响,通过实时荧光定量PCR检测3种菌株极性延长相关基因的表达;通过免疫荧光和平板计数的方法分析ialB缺失对布鲁氏菌黏附、入侵RAW264.7细胞以及胞内存活的影响.[结果]成功构建了菌株△ialB和C△ialB;△ialB与布鲁氏菌S2株相比,生长受限,活力降低,在酸应激、高渗应激、低渗应激、多黏菌素B应激条件下存活率降低,在氧化应激条件下存活率上升;而且,△ialB的菌体形态发生改变,菌体变短,直径增加,极性延长相关基因mRNA水平的表达下调;此外,ialB缺失不影响布鲁氏菌黏附、入侵RAW264.7细胞的能力,但显著降低了布鲁氏菌胞内存活能力.[结论]入侵相关基因ialB在布鲁氏菌中具有调节细胞活性和菌体正常生长的功能,对布鲁氏菌抵抗外界环境刺激和在宿主细胞内的增殖具有重要作用.
布鲁氏菌、入侵相关基因ialB、基因缺失、RAW264.7细胞、生物学特性
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S855.3;Q599;R733.71
国家自然科学基金;国家重点研发计划
2023-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共15页
1254-1268
