东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中nce-miR-34537和靶基因PIP5AI的表达谱
[目的]本研究旨在对前期鉴定到的nce-miR-34537进行表达和序列验证,预测nce-miR-34537的靶基因并明确其分子特性,进而检测nce-miR-34537及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)侵染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂过程的表达谱,为进一步探究nce-miR-34537调控东方蜜蜂微孢子虫侵染的功能和作用机制提供基础.[方法]通过Stem-loop-RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-34537的表达和序列.通过生物信息学软件预测nce-miR-34537的靶基因PIP5KI(Ⅰ型磷脂酰肌醇4-磷酸-5-激酶基因)的理化性质等分子特性和保守基序,并构建基于氨基酸序列的系统进化树.采用RT-qPCR检测nce-miR-34537及其靶基因的表达谱.[结果]nce-miR-34537在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在和表达.nce-miR-34537共靶向PIP5KI等151个基因.PIP5KI蛋白的分子式为C882H1 364N226O251S7,分子量约为19.37 kDa,含160个氨基酸和17个磷酸化位点,但不含信号肽,可同时定位于细胞核、线粒体、细胞质和分泌囊泡.东方蜜蜂微孢子虫的1个PIP5KI(AAJ76_2700017870)含4个保守基序,另1个PIP5KI(EEQ82436.1)含5个保守基序.东方蜜蜂微孢子虫、蜜蜂微孢子虫(N.apis)和鮟鱇思普雷格孢虫(Spraguea lophii)的 PIP5KI在进化树中聚为一支,且东方蜜蜂微孢子虫的PIP5KI(EEQ82436)与蜜蜂微孢子虫的PIP5KI(EQB60549.1)的进化距离最近.相较于接种后1 dpi(day post inoculation),nce-miR-34537在2 dpi上调表达(P＞0.05),而在4 dpi、6 dpi和8 dpi的表达量均显著下调(P＜0.05);PIP5KI在2 dpi表达量显著上调(P＜0.05),在4 dpi、6 dpi和8 dpi的表达量均显著下调(P＜0.05).[结论]nce-miR-34537在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在和表达,东方蜜蜂微孢子虫的PIP5KI(EEQ82436)与蜜蜂微孢子虫的PIP5KI(EQB60549.1)之间亲缘关系最近,nce-miR-34537及其靶基因PIP5KI在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中均表现出上升-下降的表达规律,nce-miR-34537通过正调控PIP5KI表达潜在参与调节侵染过程.
东方蜜蜂微孢子虫、nce-miR-34537、PIP5KI、表达谱、生物信息学分析
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S884.2;R734.2;Q935
国家自然科学基金;现代农业产业技术体系;福建省自然科学基金项目;福建农林大学硕士生导师团队项目;国家级大学生创新创业训练计划项目;福建省大学生创新创业训练计划项目;福建省大学生创新创业训练计划项目
2023-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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