金属离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒的机制研究
[目的 ]探索金属离子对整合子捕获耐药基因盒的影响及其相关机制.[方法]在大肠埃希菌中构建一个1类整合子捕获耐药基因盒的体内模型.通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)测定不同浓度银(0.3、0.9、1.5 μg/mL 的 Ag+)和铜离子(5、50、100、150、210 μg/mL的Cu2+)干预后实验组和无金属离子干预对照组整合子整合频率,并用表型筛选法验证.利用质谱法测量细菌吸收的金属离子浓度,并进一步通过转录组测序方法分析银离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒的分子机制.[结果]qPCR和表型筛选法的结果表明,0.9 μg/mL银离子组整合频率为9.42×10-5(6.49×10-5,1.44×10-4),1.5 μg/mL银离子组整合频率为7.29×10-5(4.45×10-5,9.03×10-5),与对照组 2.59×10-4(2.24×10-4,3.33×10-4)相比整合频率明显降低,差异有统计学意义(P＜0.001).而不同浓度铜离子组与对照组没有明显差异.转录组测序方法对银离子作用前后大肠杆菌基因表达水平进行对比分析,通过GO功能和KEGG通路富集发现,差异表达基因与甲基半乳糖苷转运(methylgalactoside transport)、麦芽糖转运(maltose transport)、磷酸烯醇式丙酮酸-甘油磷酸转移酶活性(phosphoenolpyruvate-glycerone phosphotransferase activity)和甘油激酶活性(glycerone kinase activity)等功能有关以及涉及氨基酸糖和核苷酸糖代谢(amino sugar and nucleotide sugar metabolism)、鞭毛组装(flagellar assembly)、阳离子抗菌肽(CAMP)耐药性[cationicantimicrobial peptide(CAMP)resistance]、果糖和甘露糖代谢和磷酸糖转移酶系统[phosphotransferase system(PTS)]等代谢通路.通过蛋白互作网络筛选出前12个枢纽基因(ptsG、mnalE、lamB、lacZ、malK、basR、ais、ugd、nagE、metN、malQ 和 malF).[结论]一定浓度银离子可以抑制整合子整合耐药基因盒.铜离子对整合频率影响不明显,因此不是所有具有杀菌性的金属离子都能对整合频率产生影响.银离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒可能是通过影响麦芽糖转运和碳分解代谢来调控.然而,碳分解代谢和麦芽糖转运过程很复杂,需要进一步研究.目前尚无细菌整合子转录组学相关研究,这为解决细菌耐药性问题提供了一个新的途径.
金属、整合子、基因盒、耐药、转录组测序
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R733.3;S;TP316.81
2022-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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