利用CRISPR-Cas9技术构建敲除VDH的产香兰素拟无枝酸菌
[目的]建立适用于拟无枝酸菌(Amycolatopsis sp.)的CRISPR-Cas9基因编辑系统,敲除其编码香兰素脱氢酶基因(VDH),减少发酵副产物香草酸.[方法]以VD为靶标基因,将pKCcas9dO质粒上的tipA、j23119启动子分别替换为pRLE6质粒Kmr启动子、链霉菌中常用的强启动子permE*,同时将sgRNA替换为能识别靶基因香兰素脱氢酶的特异性sgRNA,获得质粒pKCKmCas9VDH.然后将其与靶基因的上下游同源臂连接,获得敲除质粒pLYZYP01.将pLYZYP01质粒电转进Amycolatopsis sp.感受态细胞,筛选获得VDH的敲除突变体菌株.[结果]利用上述方法,成功获得VDH敲除菌株Amycolatopsis sp.△VDH.[结论]建立了适用于拟无枝酸菌CCTCCM2011265的基因敲除系统,成功敲除VD基因,在添加12 g/L底物阿魏酸的情况下,香兰素产量达到9.19 g/L,摩尔转化率由88.6％提高到97.7％.
拟无枝酸菌;CRISPR-Cas9;基因敲除;香兰素
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Q939.11+2;Q78;S663.1
国家轻工技术与工程一流学科自主课题LITE2018-04
2021-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共11页
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