天蓝色链霉菌孢子色素whiE在大肠杆菌中的异源生物合成
[目的]在大肠杆菌中完整重构孢子色素whiE的生物合成途径,分离纯化表达体系中合成的新化合物,并解析whiE的生物合成途径.[方法]构建whiE-ORFⅡ、whiE-ORFVⅦ和whiE-ORFⅠ的单基因重组质粒,SDS-PAGE检测蛋白表达情况;借助XbaⅠ与Spe Ⅰ互为同尾酶的特性,实现多基因组合串联;构建好的重组质粒再导入大肠杆菌菌株BAP1中进行异源表达,并用高效液相色谱(HPLC)检测发酵产物;依次使用正相硅胶柱和反向半制备柱分离发酵产物,四级杆飞行时间质谱仪(Q-TOF MS)鉴定发酵产物分子量.[结果]whiE-ORFⅡ、whiE-ORFVⅦ和whiE-ORFⅠ均获得可溶性表达;这3个基因单个串联到菌株BTw95中均未检测到新的产物生成;而whiE-ORFⅡ和whiE-ORFVⅦ、whiE-ORFⅠ和whiE-ORFVⅦ双基因组合以及三基因组合串联到BTw95中可检测得到两种化合物ZYC-1和ZYC-2.在负离子模式下进行Q-TOF MS检测,ZYC-1的[M-H]-为419.0748,推测分子式为C23H16O8;ZYC-2的[M-H]-为465.0743,推测分子式为C24H18O10.[结论]本研究推进了孢子色素whi生物合成途径在大肠杆菌中的异源重构,分离鉴定了2个十二酮Ⅱ型聚酮化合物,并推测了孢子色素whiE的生物合成途径.
孢子色素whiE;大肠杆菌;异源生物合成;Ⅱ型聚酮化合物
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国家自然科学基金;国家重大研发计划;中科院生命有机化学国家重点实验室开放基金
2021-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共12页
3173-3184
