快速纯化重组腺联病毒的受体结合捕捉方法

摘要：

[目的]建立用于重组腺联病毒(AAV)纯化的受体结合捕捉方法.[方法]将AAV受体的多囊肾病(PKD)结构域1和2与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,利用相变循环(ITC)纯化ELP-PKD融合蛋白;分别用昆虫和AAV-293细胞制备rAAV-GFP,与ELP-PKD融合蛋白共孵育后进行ITC,从沉淀复合物提取病毒DNA进行PCR检测;在优化条件下利用ELP-PKD蛋白结合捕捉rAAV-GFP,利用电子显微镜观察、免疫转印和细胞感染试验进行rAAV鉴定.[结果]ELP-PKD融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC纯化的蛋白纯度大于90％;ELP-PKD蛋白能特异结合rAAV-GFP,结合具有pH、温度和时间依赖性,受体结合捕捉方法可在1h内完成,从两种细胞纯化rAAV-GFP的回收率分别为58％和56％;rAAV-GFP洗脱具有pH和温度依赖性,洗脱rAAV-GFP的回收率分别为46％和44％;纯化rAAV-GFP具有AAV的典型形态和结构蛋白.[结论]建立的ELP-PKD结合捕捉法可用于不同细胞源rAAV的快速纯化.

关键词：腺联病毒受体、ELP融合表达、受体结合捕捉、重组AAV纯化

所属期刊栏目：61

分类号：Q78;Q95;Q51

在线出版日期：2021-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：621-630