副溶血弧菌SH112株OmpA蛋白的高效表达及免疫学特性

摘要：

[目的]我们前期研究表明副溶血弧菌SHll2株的OmpA蛋白在该菌的致病过程中发挥重要作用,是亚单位疫苗研制的潜在靶标抗原.本研究进一步对ompA(VPA1186)基因进行克隆表达,并研究其免疫学特性.[方法]扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段,定向克隆至表达载体,基因测序后对其编码蛋白质进行生物信息学分析.重组蛋白His-OmpA经纯化后,免疫ICR小鼠制备鼠多抗血清.Western blotting检测该蛋白的免疫原性及鼠多抗血清的特异性.动物实验验证其免疫保护率.[结果]成功表达分子量约为40.0 kDa的重组蛋白His-OmpA.制备的鼠多抗血清ELISA效价可达1:50000以上.Western blotting检测结果显示,该血清可与His-OmpA蛋白、总外膜蛋白和全菌蛋白发生特异性反应,说明所表达的目的蛋白保持原蛋白的免疫原性.此外,该高免血清可与其他主要血清型的副溶血弧菌发生特异性交叉反应,而与其他非副溶血弧菌菌株无交叉反应,表明该血清特异性较高,且提示OmpA蛋白可能是副溶血弧菌属的共同保护性抗原.小鼠免疫保护实验结果表明,该蛋白可提供约35％的免疫保护率.[结论]OmpA蛋白可作为诊断副溶血弧菌感染和亚单位疫苗研制的靶蛋白,为进一步开展该蛋白的功能研究提供了参考.

关键词：副溶血弧菌、OmpA、免疫原性、保护性作用

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资助基金：国家重点研发计划2017YFC1200201;上海市科学技术委员会科研计划17140900400

在线出版日期：2019-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1937-1947