鸭源新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒的毒力和复制能力
[目的]研究鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白核定位信号(nuclear localization signal,NLS)突变对其毒力和复制能力的影响.[方法]利用鸭源NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17 Ⅰ酶切位点,将overlap PCR方法获得的M蛋白NLS突变的片段替换到pNDV/SS 1GFP中获得全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm.通过反向遗传学技术拯救M蛋白NLS突变体病毒,并对拯救的病毒进行血凝(hemagglutination,HA)试验、荧光试验和M基因测序鉴定.另外,对突变体病毒进行M蛋白的亚细胞定位观察,以及病毒的生物学特性、空斑形成能力和体外增殖能力测定.[结果]成功构建M蛋白NLS突变的全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm.细胞转染物接种鸡胚后的第1代尿囊液无HA效价,盲传3代才能检测到拯救病毒的HA效价.进一步的荧光试验和M基因测序确定拯救的病毒是突变体病毒rSS1GFP-M/NLSm.与亲本病毒rSS1GFP相比,突变体病毒M蛋白由细胞核定位变为细胞质定位.此外,突变体病毒的毒力、在鸡胚上的复制能力以及在细胞中的空斑形成能力显著降低,并且感染细胞后产生的细胞病变轻微,M蛋白和绿色荧光蛋白的表达量均降低,说明M蛋白NLS突变使病毒的体外增殖能力受到抑制.[结论]NLS突变导致的M蛋白细胞核定位功能丧失可明显降低鸭源NDV的毒力和复制能力.
新城疫病毒、M蛋白、细胞核定位、核定位信号、病毒复制
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国家自然科学基金31760732,31502074;贵州省科学技术基金黔科合J字[2015]2054号;贵州大学引进人才科研项目贵大人基合字[2014]10号
2018-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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