双孢蘑菇酪氨酸酶基因在酿酒酵母中的异源表达及其酶学特性

摘要：

[目的]在酿酒酵母中异源表达双孢蘑菇来源的酪氨酸酶基因PPO2,并研究酪氨酸酶在酿酒酵母胞内及胞外的酶学特性.[方法]提取双孢蘑菇总RNA,通过RT-PCR克隆酪氨酸酶基因PPO2,构建表达载体pSP-G1-PPO2,并转化至酿酒酵母进行表达,采用镍亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质.[结果]在酿酒酵母中正确表达了大小为65 kDa的酪氨酸酶蛋白.重组酶能催化底物酪氨酸产生黑色素.体外活性测定表明,酪氨酸酶催化最适温度为45C,以酪氨酸和多巴为底物时最适pH分别为7.0和8.0.在酿酒酵母中测得底物酪氨酸浓度低于2.5 mg/mL时,黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性.[结论]来源于双孢蘑菇的酪氨酸酶基因PPO2在酿酒酵母中成功表达,重组酶具有良好的酶学特性.利用酪氨酸酶产物黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性这一特性,可将其作为细胞酪氨酸产量的传感器,为高通量筛选酪氨酸高产菌株提供了思路.

关键词：酪氨酸酶、异源表达、双孢蘑菇、酿酒酵母、酶学特性

所属期刊栏目：58

资助基金：天津市应用基础与前沿技术重点项目;Supported by the Tianjin Key Research Program of Application Foundation and Advanced Technology,China

在线出版日期：2021-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：423-431