Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶可溶性表达及产酶条件优化
[目的]克隆Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶的编码基因(alanine dehydrogenase),转化至Escherichia coli Rosetta (DE3)中构建可溶性表达alanine dehydrogenase (ald)的工程菌CZR07并优化产酶条件.[方法]提取A.ureafaciens CZ31菌株的全基因组DNA,设计引物扩增出ald基因,与pET-28a连接后导入E.coli Rosetta中表达并纯化重组蛋白,以单因素实验结果为依据,响应面法优化发酵条件.[结果]ald全长为1119 bp,编码含372个氨基酸残基的蛋白质,分子量约为40 kDa,酶活为2.65 U/mg.响应面分析温度、诱导时间及诱导剂浓度的影响强度为IPTG浓度＞温度＞温度xIPTG浓度＞温度×诱导时间＞IPTG浓度×诱导时间＞诱导时间.CZR07摇瓶发酵最佳条件为温度22℃、IPTG 0.7 mmol/L、诱导时间7h,此条件下重组酶酶活达到15.23 U/mg,与响应面优化的预测值相似,较优化前提高5.75倍.[结论]克隆并实现了CZ31中ald基因的可溶性表达,采用BBD法优化产酶的诱导条件,获得显著的优化效果,为其他工程菌株产酶条件优化提供借鉴.
Arthrobacter ureafaciens CZ31、丙氨酸脱氢酶、克隆表达、响应面优化
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R73;TQ9
the National Natural Science Foundation of China21376184;by the Project Sponsored by the Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars,State Education Ministry 国家自然科学基金21376184;教育部留学回国人员科研启动项目
2017-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共10页
1778-1787
