肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

摘要：

[目的]以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础.[方法]参考GenBank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041△slyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域.[结果]PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041△slyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成.[结论]成功获得了肠炎沙门菌C50041△slyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白.

关键词：肠炎沙门菌、SlyD蛋白、基因敲除、肽脯氨酰顺反异构酶

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资助基金：国家自然科学基金重点国际合作项目31320103907;国家公益性行业农业科研专项201403054;江苏省优势学科经费资助;江苏省研究生培养创新工程项目KYLX15_1384;Supported by the Key International Cooperation and Exchange Program of National Natural Science Foundation of China 31320103907,by the Special Fund for Agro-Scientific Research in the Public Interest 201403054,by the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions and by the Research and Innovation Project for College Graduates of Jiangsu Province KYLX15_1384

在线出版日期：2016-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1282-1290