一种具有高β-葡聚糖酶活性的几丁质外切酶基因的克隆、表达和性质鉴定
[目的]表达并鉴定来源于维氏气单胞菌的几丁质酶Chi92并研究其作为水产饲用酶的有效性.[方法]自A.veronii B565中克隆chi92基因并在Pichia pastoris GS115中进行表达,对表达成功的Chi92进行分离纯化和生化鉴定.最后将Chi92添加到含有毕赤酵母粉的饲料中饲喂斑马鱼2周,研究Chi92添加对斑马鱼生长、饲料利用率、肠道微绒毛形态和抗病性能的影响.[结果]chi92基因编码具有864个氨基酸残基的多肽.Chi92在pH 6.0和40℃时表现最佳酶活.Chi92对蛋白酶有抗性,同时酶活不受金属离子显著影响.Chi92具备高几丁质酶活(69.4 U/mL).以胶体几丁质和β-1,3-1,4-葡聚糖作为底物时,比活力分别为809.2 U/mg和235.6 U/mg.薄层层析和电喷雾电离质谱联用技术均表明N-乙酰葡糖胺二聚体是Chi92酶解胶体几丁质的主要产物.Chi92在对酵母细胞壁的降解方面比其他几丁质酶性能更加优良.经过2周饲喂,添加有Chi92的饲料显著提高了斑马鱼肠道微绒毛的高度和密度,同时斑马鱼的生长,饲料利用率,以及抗病性能均得到了一定提高.[结论]Chi92具有pH稳定性、抗逆性和高酵母细胞壁降解功能,能较好地作为饲用酶用于温水水产养殖.
几丁质酶、Chi92、维氏气单胞菌、斑马鱼
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国家科技支撑计划课题2013BAD10B01-2-3;海洋公益性行业科研专项经费201305022-6;北京市现代农业产业技术体系SCGWZJ20121104-4Supported by National Science and Technology Support Program Project of China 2013BAD10B01-2-3, by the Ocean Industry Research Special Funds for Public Welfare Projects 201305022-6, and by the Beijing Earmarked Fund for Modern Agro-industry Technology Research System SCGWZJ20121104-4
2016-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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