小鼠体内SEG蛋白靶向运送shRNA抑制狂犬病毒复制
[目的]本试验前期已经证实,用单链抗体(scFv)-绿脓杆菌跨膜区(ETA)-酵母DNA结合结构域(GAL4)表达的蛋白(简写为SEG蛋白),SEG能与含shRNA (short hairpin RNA)的质粒(pRNATU6.3-shRNA)结合形成复合物SEG-shRNA,并靶向运送该质粒进入感染狂犬病毒(Rabies virus,RV)的细胞,抑制RV复制.本研究用感染狂犬病病毒的小鼠模型,进行SEG-shRNA复合物小鼠体内靶向性运送siRNA(short interfering RNA)和抑制RV复制的研究.[方法]用已建立RV CVS-24株小鼠肌肉注射模型进行试验.取50 LD50 CVS-24攻毒,在攻毒后12h尾静脉注射SEG-shRNA,流式细胞仪检测SEG-shRNA的体内靶向性;同样方法攻毒后,尾静脉注射SEG-shRNA,连续4d,攻毒后第5天小鼠脑组织用qRT-PCR、RT-PCR、 Western blot、免疫荧光染色法检测其中RV的含量;统计小鼠存活率;并检测小鼠体内IFN-α含量,从而分析SEG-shRNA在体内的抗病毒作用.[结果]结果表明仅在RV攻毒小鼠的注射部位检测到绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达,未注射RV的腿部及脑、肝、脾、肾均无GFP表达,说明SEG-shRNA可靶向RV感染细胞运送shRNA.攻毒后第5天脑组织qRT-PCR结果表明靶向药物组比病毒对照减少4.88倍(3.9/0.8);RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色试验结果表明使用SEG-shRNA组病毒量明显少于病毒对照组;且攻毒后13d,动物存活率达50％,而病毒对照100％死亡.检测小鼠体内IFN-α未见升高.[结论]以上试验表明SEG蛋白在小鼠体内靶向运送含shRNA的质粒到感染组织细胞;对小鼠体内RV有明显抑制作用,因此可以用于狂犬病毒感染的特异辅助性救治研究.
狂犬病毒、shRNA、靶向传递、小鼠、动物模型
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Supported by the Public Welfare Agricultural Industry Research Special Program 201103032, 201303042;公益性行业农业科研专项201103032,201303042
2016-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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