长双歧杆菌N-乙酰氨基己糖1-位激酶的活性位点
[目的]研究长双歧杆菌(Bifidobacterium longum) JCM1217的N-乙酰氨基己糖1-位激酶(N-acetylhexosamine 1-kinase,NahK)中对催化活性有影响的位点.[方法]利用点突变试剂盒,获得NahK的4个位点的共10种单点突变体表达菌株.诱导表达并纯化野生型和突变体酶,用DNS法和NADH偶联的微孔板分光光度法检测野生型及突变体酶的最适pH和最适Mg2+浓度,并测定酶促反应动力学参数.[结果]D208A、D208N、D208E和I24A四种突变体的催化活性几乎丧失.突变体H31A、H31V、F247A和I24V的最适pH由野生型的7.5变为7.0,突变体H31A和F247A的最适Mg2+浓度由野生型的5 mmol/L变为10 mmol/L.反应动力学参数测定结果表明,突变体F247Y对底物GlcNAc/GalNAc及ATP的催化活性均高于野生型.[结论]通过定点突变,确定了对NahK催化活性有影响的4个位点,并且获得了一个催化效率提高的突变体(F247Y),为进一步对NahK进行分子改造奠定了一定基础.
N-乙酰氨基己糖1-位激酶、活性位点、长双歧杆菌、DNS法、NADH偶联的微孔板分光光度法
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2016-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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