大肠杆菌BL21(DE3)膜组分相关基因的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响
[目的]探究Escherichia coli BL21(DE3)中膜组分相关的脂多糖合成基因waaF或msbB的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响.[方法]运用Red重组技术将E.coli BL21 (DE3)染色体上的基因waaF或msbB敲除,构建敲除菌株E.coli BL21(ΔwaaF)、E.coli BL21(ΔmsbB).将本实验室保存的带有β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,ββ-FFase)、青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因的重组质粒pET-ffase、pET-pga分别转入敲除菌株及出发菌株中,构建工程菌株E.coli BL21(ΔmsbB)/pET-ffase、E.coli BL21(ΔwaaF)/pET-ffase、E.coli BL21(DE3)/pET-ffase、E.coli BL21(ΔmsbB)/pET-pga、E.coli BL21(ΔwaaF)/pET-pga、E.coli BL21 (DE3)/ pET-pga.最后通过摇瓶发酵研究敲除菌株对β-FFase、PGA胞外分泌的影响.[结果]当诱导表达4h,以出发菌株E.coli BL21 (DE3)为宿主时,β-呋喃果糖苷酶β-FFase的胞外分泌量占总表达量的2.6％,以敲除菌株ΔmsbB为宿主时,胞外分泌量达到19.7％,而以敲除菌株ΔwaaF为宿主时,胞外分泌量达到50.9％.另外,当诱导表达24 h,以敲除菌株ΔwaaF为宿主时,青霉素G酰化酶PGA的胞外酶活是出发菌株中的4.1倍,达到1708 U/L.[结论]本研究成功构建了敲除菌株ΔmsbB和ΔwaaF,ΔmsbB能明显增强β-FFase的胞外分泌,而ΔwaaF对β-FFase和PGA的胞外分泌均有显著的强化作用.
大肠杆菌BL21(DE3)、膜脂、基因敲除
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Q786(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金21376119;国家“973”项目2011CBA00807Supported by the National Natural Science Foundation of China 21376119 and by the National Program on Key Basic Research Project 2011CBA00807
2016-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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