酿酒酵母转运蛋白Agp1p泛素化对氮源利用的影响

摘要：

[目的]研究酿酒酵母细胞膜关键氮源转运蛋白Agp1p的泛素化对其氮源利用的影响.[方法]构建一个基于双分子荧光互补技术的泛素化检测载体,检测Agp1p是否受到泛素化.采取定点突变的方法对Agp1p中可能的泛素化位点进行突变,研究其泛素化的关键作用位点及其对酿酒酵母氮源利用的影响.[结果]在谷氨酰胺、精氨酸、脯氨酸及铵盐为唯一氮源的培养基中,转运蛋白Agp1p均受到泛素化调控.定点突变实验结果显示,与出发菌株相比,潜在泛素化位点突变后,菌体荧光强度均有一定程度减弱.其中四重突变体Agp1pK11,14,98,112R荧光强度最弱,表明泛素化过程被显著抑制.系列突变菌株在9种氨基酸为复合氮源以及尿素为单一氮源的发酵实验表明,四重突变体菌体氮源利用率提高效果显著.[结论]转运蛋白Agp1p的泛素化受到不同氮源的影响,泛素化位点突变可以显著影响其泛素化过程,从而改变细胞对氮源的利用过程.

关键词：酿酒酵母、泛素化、透性酶、双分子荧光互补技术、运转蛋白Agp1p

所属期刊栏目：55

分类号：Q935(微生物学)

资助基金：Supported by the Major Project of China National Programs for Fundamental Research and Development 2012CB720802 and by the Key Project of Chinese National Natural Science Foundation 31130043;国家“973项目”2012CB720802;国家自然科学基金重点项目31130043

在线出版日期：2015-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：570-578