法氏囊活性五肽BP5的抗肿瘤作用
[目的]法氏囊活性五肽Bursopentin(BP5)是一种多功能生物学活性因子,不仅具有免疫调节和抗氧化功能,还具有抗肿瘤活性.目前,BP5发挥抗肿瘤生物功能的作用机制尚不清晰.[方法]本研究利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞T7噬菌体cDNA文库,以BP5-BSA为靶分子对文库进行亲和淘选,通过序列测定和生物信息学分析,获得BP5的结合蛋白.通过分析BP5诱导的鸡DT40细胞mRNA基因表达谱和检测BP5对HCT116细胞中p53 Luciferase活性和p53信号通路中相关蛋白表达的影响来探讨BP5抗肿瘤的作用机制.[结果]构建的鸡DT40细胞T7噬菌体cDNA文库原始滴度为1.2×104 pfu/mL,重组率为91.7％,扩增后滴度为1.9×109 pfu/mL;通过生物淘选获得3条与BP5结合的鸡源蛋白血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A)、细胞周期蛋白E1 (cyclin E1)和运输蛋白颗粒复合体2(trafficking protein particle complex 2).基因表达谱分析结果显示,BP5参与调节多条与抗肿瘤功能有关的通路,其中包括p53信号通路,且p53信号通路涉及的5个差异表达基因均与细胞周期调控或抗肿瘤相关,其中SIAH1、TP53 (p53)、CIP1(p21)基因被上调,CHEK2、CCNE1基因被下调.RT-PCR方法检测10个表达水平有明显变化的差异基因,其结果与基因芯片分析结果相符;BP5对p53 Luciferase活性的影响实验结果显示,BP5在0.2-20μg/mL浓度下能够明显提高HCT116细胞中p53相对Luciferase活性,Western blotting结果证实,BP5能显著促进p53、p21蛋白的表达水平,而CCNE1和CHEK2蛋白的表达水平则明显降低.[结论]本研究结果表明BP5通过p53信号通路途径发挥其抗肿瘤生物学功能,为进一步研究BP5抗肿瘤具体的分子机制提供了参考依据.
Bursopentin(BP5)、鸡DT40细胞、T7噬菌体cDNA文库、相互作用蛋白、p53信号通路、抗肿瘤
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R392
Supported by the National Natural Science Foundation of China 31101792,31201928 and by the Foundation for University Key Teacher by Higher Education of Henan Province 2012GGJS-077;国家自然科学青年基金31101792和31201928;河南省高校青年骨干教师项目2012GGJS-077
2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
235-245
