结核分枝杆菌MPT83的免疫原性及其奶牛结核病血清学检测方法的建立
[目的]利用大肠杆菌系统表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白,通过小鼠模型评价其免疫原性,建立血清学间接ELISA方法用于牛结核病临床检测,评价其应用潜能.[方法]构建pET30a(+)-mpt83重组质粒,转化BL21(DE3)诱导表达并纯化,经细胞表面分子的流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)分析、ELISPOT试验等分析其在小鼠中的免疫原性,建立间接ELISA方法,检测临床奶牛血样,评价其用于牛结核病血清学检测的潜能.[结果]SDS-PAGE显示目的蛋白成功表达,Western blot证实其对兔抗H37Rv多抗血清具有良好免疫反应性;FCM结果显示其下调树突状细胞表面CD80分子的表达,上调小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞表面CD69的表达,ELISPOT结果表明其诱导的特异性IL-4分泌细胞数显著高于IFN-γ分泌细胞数,表现为Th2型免疫应答;建立了ELISA方法,检测临床奶牛血样200份,与牛结核外周血γ-干扰素体外释放试验结果的阳性符合率和阴性符合率分别为48.6％和90％.[结论]在大肠杆菌系统中高效可溶性表达MPT83蛋白,其在小鼠模型中主要呈现Th2型免疫应答,并以该蛋白为抗原建立了牛结核病血清学检测的间接ELISA方法.
牛结核病、MPT83蛋白、原核表达、免疫原性、血清学检测
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R392
Supported by the Key Project of China National Programs for Fundamental Research and Development 2012CB518805 and by the Project Funded by the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions;国家“973项目”2012CB518805;国家星火计划项目2014GA690017;扬州市自然科学基金项目YZ2014027;江苏高校优势学科建设工程资助项目
2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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