盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达
[目的]八氢番茄红素脱氢酶PDS为真核膜结合蛋白,我们通过更换不同的表达策略,探索在大肠杆菌中表达真核膜结合蛋白的方式.[方法]利用RACE的方法克隆盐藻PDS的全长cDNA序列.利用原核表达载体pET-28a构建pET-28a-PDS表达载体;使用PLtac启动子替换T7启动子构建pET-PLtac-PDS表达载体;合成Mistic序列融合入pET-28a中构建了pET-Mistic-PDS融合表达载体.分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.[结果]获得了盐藻PDS基因的全长cDNA序列2237 bp,开放阅读框为1749 bp,共编码582个氨基酸(NCBI登录号为GQ923693.1).利用pET-28a-PDS和pET-PLtac-PDS表达的PDS蛋白表达量低,并以包涵体形式存在;利用pET-Mistic-PDS载体表达的PDS蛋白表达量明显提高,且大部分以可溶蛋白形式存在,具有脱氢酶活性.[结论]实验结果表明Mistic作为促溶标签能促进膜蛋白的正确折叠,提高蛋白的可溶性.蛋白酶活测定结果证明了Mistic的融合可以保持蛋白的天然活性.
盐藻PDS基因、同源克隆、原核表达、PLtac启动子、Mistic序列
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Q933(微生物学)
Supported by the National Natural Science Foundation of China 30970043;国家自然科学基金30970043
2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
149-155
