聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因的克隆、表达及酶学性质

摘要：

[目的]研究出芽短梗霉聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因及其酶学特性.[方法]通过设计兼并引物,采用IPCR技术从出芽短梗霉CCTCC M2012223的基因组中扩增得到苹果酰辅酶A连接酶基因的cDNA全长序列,构建表达载体,通过大肠杆菌异源表达,Ni-NTA柱层析纯化酶蛋白,分析其酶学特性.[结果]获得苹果酰辅酶A连接酶基因序列全长为1498 bp,编码440 aa,含有4个外显子和3个内含子.该重组酶最适反应温度为25℃,最适反应pH值为8.0,高浓度底物ATP明显对酶活性具有抑制作用,单体选择性表明对底物草酸、草酰乙酸、丁酸、丙二酸也具有很好催化活性.[结论]成功从出芽短梗霉CCTCC M2012223中克隆获得聚苹果酸聚合途径的苹果酰辅酶A连接酶基因,为聚苹果酸聚合途径解析及新型可降解材料创制奠定基础.

关键词：出芽短梗霉、苹果酰辅酶A连接酶基因、聚合途径、单体选择性

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分类号：Q936(微生物学)

资助基金：国家863计划项目2014AA021205;中央高校基本科研业务费专项资金XDJK2013B039;重庆药物过程与质量控制工程技术研究中心能力提升项目CSTC2012 gg-yyjsb10002-33;Supported by the National High Technology Research and Development Program of China 863 Program 2014AA021205,by the Fundamental Research Funds for the Central Universities XDJK2013B039 and by the Ability Program of Chongqing Engineering Research Center for Pharmaceutical Process and Quality Control CSTC2012 gg-yyjsb10002-33

在线出版日期：2014-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：919-925