北极海洋链霉菌604F的卤化酶基因克隆及特征

摘要：

[目的]本研究旨在克隆来自北极海洋、具有合成卤化物潜力的链霉菌(Streptomyces sp.)604F中的一个卤化酶基因,为后续克隆卤化物合成基因簇、分离鉴定卤化物提供指导.[方法]利用琼脂块法初步测试抗菌活性,借助液相色谱-飞行时间串联质谱技术(LC-Tof MS)初步寻找Streptomyces sp.604F发酵粗提液中的卤化物,并以简并PCR扩增合成次级代谢产物的指示基因(Ⅰ型、Ⅱ型聚酮合酶及非核糖体多肽合成酶编码基因);根据依赖黄素腺嘌呤二核苷酸的卤化酶基因保守区设计的简并引物,扩增基因片段并测序分析;采用高效热不对称交错PCR (hiTAIL-PCR)技术扩增卤化酶基因全长.[结果]Streptomyces sp.604F具有较强的抗白色念珠菌活性,其基因组同时含有编码Ⅰ型聚酮合酶、Ⅱ型聚酮合酶和非核糖体多肽合成酶基因,以及卤化酶基因;通过染色体步移克隆该卤化酶基因全长,共1443 bp,编码一个新的非色氨酸卤化酶,在合成已知卤化物的卤化酶数据库中,与其同源关系最近的为一类参与合成糖肽类次级代谢产物的卤化酶.[结论]Streptomyces sp.604F具有新的非色氨酸卤化酶,且推测参与糖肽类化合物的卤化修饰,为后续寻找目的卤化物提供了指导,也为研究该合成基因簇奠定基础.

关键词：卤化酶、放线菌、北极

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分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家“863计划”2012AA092105;南北极环境综合考察与评估专项CHINARE01-06;上海市自然科学基金项目13ZR1462700 Supported by the National Programs for High Technology Research and Development of China 2012AA092105,by the Special Foundation for Comprehensive Survey of the Polar Environment CHINARE01-06 and by the Natural Science Foundation of Shanghai 13ZR1462700

在线出版日期：2015-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：703-712