反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默

摘要：

[目的]探讨反义RNA技术介导的大肠杆菌非必需基因rpsF基因沉默导致菌体生长受抑制的原因.[方法]将rpsF基因5'端41-230 bp的片段反向插入带有末端配对结构的反义表达载体pHN678,获得重组质粒,导入大肠杆菌宿主获得反义RNA菌株Escherichia.coli/pHNF,并用诱导剂IPTG诱导反义RNA表达,通过与对照菌E.coli/pHN678的液体生长状态差异判断菌体生长表型;采用Real time RT-PCR方法跟踪分析转录水平.[结果]构建了针对rpsF的反义RNA菌株,且其生长受抑制程度与IPTG浓度呈正相关.IPTG浓度为100μmol/L时,菌体生长未受抑制,但靶基因rpsF的mRNA量降低了36％,而rpsR是位于同一操纵子下游的必需基因,其转录水平却未受影响;IPTG浓度为200 μmol/L时,菌体生长明显受抑制,经分析发现rpsR转录水平降低了12％.[结论]反义RNA菌株E.coli/pHNF生长受抑制的原因是由于此反义RNA引起了同一操纵子下另一必需基因rpsR的转录水平降低.

关键词：反义RNA、非必需基因rpsF、基因沉默、操纵子、Real time RT-PCR

所属期刊栏目：54

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金81102355;the National Natural Science Foundation of China81102355

在线出版日期：2014-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：449-454