一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达
[目的]从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株,寻找使用价值较高的碱性蛋白酶.[方法]通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株,经生理生化方法及16S rDNA基因序列鉴定菌株；利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框；蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli BL21 (DE3)中进行重组表达；纯化活性蛋白酶后,利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力.[结果]分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌(Bacillus sp.) L010；蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基,编码382个氨基酸,氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽,77个氨基酸残基构成的前导肽,C端275个氨基酸残基组成的成熟肽；此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员,并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)中重组表达时,在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶；SprD呈现出较高的催化活力,其反应最适条件为温度70℃,pH 9-10.[结论]SprD在碱性(pH 7.0-10.0)、中高温(25℃-60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值.
自加工、芽胞杆菌(Bacillus sp.)L010、大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)、表达、聚合酶链式反应、蛋白酶SprD
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Q814(生物工程学(生物技术))
the National Programs for High Technology Research and Development of China2012AA022204;by the Science and Technology Projects of Sichuan Province2012GZ0003;国家"863计划"2012AA022204;四川省科技项目2012GZ0003
2013-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共11页
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