应用基因敲除快速构建大肠杆菌突变体改造脂肪酸代谢途径

摘要：

[目的]基因敲除技术是研究基因功能的重要手段.我们试图建立一种快速、高效的大肠杆菌基因敲除方法.[方法]利用大肠杆菌(Escherichia coli) BW25113单基因缺失体Keio文库,将经典的Red同源重组技术与P1噬菌体转导技术相结合,对E.coli MG1655脂肪酸代谢基因进行快速敲除.[结果]获得了大肠杆菌β-氧化途径的缺失菌株△fadD、△fadE和△fadD-△fadE；脂肪酸合成途径缺失菌株△fabH、△fabF和△fabH-△fabF.敲除fadD和fadE对生长情况没有影响；敲除fabH后,生长速度明显减慢；敲除fabF对生长几乎没有影响.FadD、FadE及双敲缺失体的脂肪酸含量18.2 mg/L、20.0mg/L和19.2 mg/L,略高于野生型17.5 mg/L;FabH、FabF及双敲缺失体的含量分别为12.6 mg/L、15.2 mg/L和11.2 mg/L,明显低于野生型.[结论]在单基因突变体文库基础上,利用P1噬菌体转导、Red同源重组和抗性基因消除进行基因敲除,简化了构建大肠杆菌单基因和多重突变体的方法.

关键词：大肠杆菌、Red同源重组、P1噬菌体、基因敲除、脂肪酸含量

所属期刊栏目：53

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China31170040;by the State Key Laboratory of Microbial Resources20110603;自然科学基金项目31170040;微生物资源前期开发国家重点实验室开放课题项目20110603

在线出版日期：2013-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：608-614