一种增加重组毕赤酵母拷贝数提高胰岛素前体产量的策略

摘要：

[目的] 为了进一步提高毕赤酵母表达生产人胰岛素前体的产量,[方法] 将构建的表达载体pPICZα-IP 电转至毕赤酵母X-33中,在100 μg/mL zeocin的YPDS抗性平板筛选获得过量表达人源胰岛素前体(IP)的重组菌株B4和S6.在此基础上,以过量表达胰岛素前体的B4和S6为出发菌株,以SacI线性化的表达载体pPICZα-IP进行重复电转化,并在1000 μg/mL zeocin的YPDS平板上筛选获得一株拷贝数为7的重组毕赤酵母2B4.[结果] 该菌株在5L规模发酵罐上,人源胰岛素前体产量是低拷贝数菌株B7的2.7倍,且菌体并未因拷贝数高而表现出生长不良的现象.实时定量PCR检测后,发现2B4菌株胰岛素前体基因的转录水平是B7的2倍.[结论] 综上结果表明,采用抗性筛选和重复电转相结合的高拷贝重组毕赤酵母构建策略,能有效促进目的基因的转录水平,最终显著提高目标蛋白的产量.

关键词：多拷贝重组毕赤酵母、胰岛素前体产量、重复电转、pPICZα

所属期刊栏目：53

分类号：Q935(微生物学)

资助基金：the Program for Young Talents in China by the Provincal Outstanding Youth Foundation of Jiangsu ProvinceBK2012002;by the Program for Innovative Research Team in UniversityIRT1249;by the National Natural Science Foundation of China31101229;中组部首批青年拔尖人才支持计划;江苏省杰出青年基金BK2012002;教育部创新团队发展计划IRT1249;国家自然科学基金31101229

在线出版日期：2013-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：545-552