四种cry基因启动子在spoⅢD基因突变株中的活性比较

摘要：

[目的]分析spoⅢD基因突变对苏云金芽胞杆菌cry1、cry、cry4和cry8基因启动子Pcry1Ac、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E的影响,比较以上启动子在无芽胞spoⅢD基因突变体(HD-△SpoⅢD)中的转录活性.[方法]分别构建了Pcry1Ac、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E与lacZ基因融合的转录分析载体,并导入HD-73野生型菌株和HD-△SpoⅢD突变株中测定β-半乳糖苷酶活性;通过高温诱变方法在HD-△SpoⅢD基础上筛选出缺失cry1Ac基因的HD - -△SpoⅢD突变体;构建了4种启动子与cry1Ac基因融合表达载体,分别将它们转入HD-△SpoⅢD和HD - -△SpoⅢD中,分析Cry1Ac蛋白表达量及其生物活性.[结果]HD-73和HD-△SpoⅢD菌株中四个启动子转录活性由高到低分别为:Pcry8E＞Pcry1Ac＞Pcry4A＞Pcry3A;spoⅢD基因的缺失未影响Pcry1Ac和Pcry8E转录活性,Pcry3A在HD-△SpoⅢD菌株中转录活性略有升高,Pcry4A在HD-△SpoⅢD菌株中转录活性在T5到T10略有降低.从翻译水平来看在HD-△SpoⅢD中cry8E启动子略低于cry1Ac启动子,并高于Pcry4Aa,Pcry3A指导的Cry1Ac蛋白产量,生物活性测定结果与蛋白表达量相符.[结论]cry8E基因启动子Pcry8E在spoⅢD突变体中在转录水平活性是最高的启动子,而cry1Ac启动子指导自身基因cry1Ac表达时,在翻译水平上略高于cry8E启动子指导的Cry1Ac产量.

关键词：苏云金芽胞杆菌、spoⅢD基因突变株、cry基因启动子、转录活性、Cry蛋白表达量

所属期刊栏目：52

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家“973”项目2009CB118902;国家自然科学基金31070083

在线出版日期：2012-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1075-1084