糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)漆酶POXA1在里氏木霉中的高效表达及酶学性质
[目的]将优化后的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)漆酶基因poxl,在里氏木霉中进行高效表达并对重组表达的漆酶进行酶学性质测定.[方法]:根据里氏木霉的密码子偏好性,对漆酶POXA1密码子进行优化并合成.以质粒pBluscriptⅡSK(+)为骨架,利用里氏木霉纤维二糖水解酶基因(cbhl)的启动子和终止子序列构建里氏木霉外源蛋白表达载体pSKLDT.PEG介导的原生质体转化方法转化里氏木霉菌株Tu6,筛选获得漆酶表达工程菌；通过木霉工程菌摇瓶发酵培养后对发酵液上清中的漆酶进行纯化,并对异源表达的漆酶酶学性质进行研究.[结果]经尿嘧啶缺陷培养基筛选获得木霉阳性转化子,通过PCR分析及漆酶酶活性筛选获得漆酶高效表达重组菌LC-7,该重组菌经摇瓶发酵144h后粗酶液酶活达237.134IU/mL,酶活较其出发菌Pleurotus ostreatus提高了28.6倍.酶学性质研究表明,纯酶的比活为9852IU/mg,最适温度为50℃,最适pH为3.0,最适底物为ABTS,该漆酶催化ABTS的Km和Vmax分别为7.58×10-2 mmol/L及9.752×10-3mmol/L/min,金属离子Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mn2+、Ba2+、Mg2+等对漆酶有不同程度的抑制作用,但Fe2+能明显的抑制漆酶的催化活性.[结论]外源漆酶基因能在里氏木霉中实现高效分泌表达.
漆酶、里氏木霉、cbhl启动子、异源表达、糙皮侧耳
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Q814(生物工程学(生物技术))
福建省发改委产业化关键技术项目闽发改投资[2009]958号;国家自然科学基金30970073;国家"973项目"2011CB707402;中国科学院重大专项KSCX1-YW-11B3
2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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