红纹黄单胞菌α-氨基酸酯水解酶的分离纯化及酶学性质
[目的]从红纹黄单胞菌中分离纯化了胞内α-氨基酸酯水解酶(AEH),并进行了酶学性质研究.[方法]采用乙酸丁酯破碎细胞,并相继用磷酸钙凝胶沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sephadex A-50阴离子交换处理、CM Cellulose 52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析纯化得到了电泳纯α-氨基酸酯水解酶,并研究了此酶的酶学性质.[结果]SDS-PAGE显示α-氨基酸酯水解酶的亚基分子量为70 kDa.酶促合成头孢克洛的最适pH为6.8,最适温度为42℃,在pH5.0 -8.0和35℃以下,酶保持了良好的稳定性.Mn2+和Ca2+对酶活有一定的促进作用,Cu2+、Fe2+及高浓度的丙酮对酶活有强的抑制作用.AEH催化D-苯甘氨酸甲酯、D-对羟基苯甘氨酸甲酯和头孢克洛水解反应的kcat/Km分别为123.7±3.7 mmol-1·s-1·L、2.9±0.6 mmol-1 ·s-1·L和101.3±2.1 mmol-1 ·s-1·L,AEH对D-苯甘氨酸甲酯的催化效率最高.AEH催化双底物反应的机制为乒乓机制,催化合成头孢克洛的kcat为547.3±38.2 s-1.[结论]有关红纹黄单胞菌α-氨基酸酯水解酶的酶学性质研究相对较少,本文的研究将为该酶催化合成β-内酰胺类抗生素的工业化应用提供重要参数.
α-氨基酸酯水解酶、β-内酰胺类抗生素、分离纯化、酶学性质、乒乓机制
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Q814(生物工程学(生物技术))
"十二五"重大新药创制科技重大专项2011ZX09401-403;四川省国际科技合作与交流研究计划项目2010HH0036;四川省国际合作计划项目2011HH0013;成都市科技计划项目10GGYB297SW-182
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
620-628
