荧光发光杆菌TT01品系pirA2B2基因的克隆表达与杀虫活性
[目的]Photorhabdus luminescens TT01基因组中的一对ORF plu4437-plu4436(简称pirA2 B2)的预测氨基酸序列与另一对已证明编码产物有口服杀虫活性的ORF plu4093-plu4092(简称pirA1B1)有50％和45％的一致性,本文旨在研究pirA2B2基因座的表达产物是否也有杀虫活性.[方法]PCR扩增并克隆了pirA2,pirB2和pirA2B2基因,构建了重组表达载体pQE-pirA2,pQE-pirB2和pQE-pirA2B2并分别转入M15菌株表达,经SDSPAGE和Western blot检测证明,3个重组菌株经IPTG诱导后,分别成功表达了可溶的PirA2,PirB2和PirA2B2 蛋白.用亲和层析结合脱盐技术对3个重组菌株表达的外源蛋白分别进行纯化,并通过生物测定确定纯化蛋白的杀虫活性.[结果]生物测定结果显示联合表达的PirA2B2对大蜡螟和斜纹夜蛾五龄幼虫均有明显的血腔杀虫活性,LD50分别为每虫4.0和2.8 μg,单独表达的PirA2或PirB2对上述2种害虫没有血腔杀虫活性,但两者的混合物具有与两者联合表达相似的杀虫活性；PirA2B2对大蜡螟和斜纹夜蛾初孵幼虫均无口服杀虫活性.[结论]pirA2B2是P.luminescens TT01菌株基因组中的另一个二元杀虫毒素基因.[意义]pirA2B2的成功克隆表达和杀虫功能的确定为进一步研究其与pirAlB1的关系以及该基因的表达调控等打下了基础.
荧光发光杆菌、杀虫毒素、基因克隆、毒素基因
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Q935(微生物学)
国家自然科学基金面上项目30771457;博士点基金20100171110032
2012-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
532-537
