重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶Tachi1的酶学性质研究及表达条件优化
[目的]对转棘孢木霉几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母工程菌GS-tachi1-K进行诱导表达,研究重组几丁质酶Tachi1的酶学性质,优化表达条件.[方法]对GS-tachi1 -K进行甲醇诱导培养,纯化目的蛋白Tachi1 进行几丁质酶酶学性质的研究；通过单因素和正交试验对GS-tachil -K菌株产几丁质酶Tachil表达条件进行优化.[结果]GS-tachi1 -K表达的几丁质酶Tachi1表观分子量约为44kDa,酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5.5,具有较宽的温度、pH适用范围；50℃以下保持较高的酶活力,在碱性条件下稳定性较差；受Ag+、Hg2+、Cu29、Fe2+和高浓度的SDS及β-巯基乙醇强烈抑制.该菌株的最佳表达条件为:pH为6.5,甲醇诱导浓度为0.5％,起始细胞浓度为OD600=2,甲醇诱导时间为180 h；几丁质酶Tachi1活力可达17.93 U/mL,蛋白表达量为6.19 g/L.[结论]成功实现了棘孢木霉新几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母高效分泌表达,工程菌GS-tachi1 -K具有高表达量和表达产物酶活性高两个特点,明确了几丁质酶Tachi1的酶学性质和最佳诱导表达条件,为该几丁质酶及其基因的深入研究和开发利用奠定了基础.
毕赤酵母、棘孢木霉、几丁质酶、酶学性质、条件优化
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Q814(生物工程学(生物技术))
2012-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
345-352
