黑曲霉H1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选

摘要：

[目的]构建溶磷黑曲霉H1的cDNA文库,并从中筛选溶磷相关基因.[方法]利用SMART技术合成黑曲霉H1的双链cDNA并将其连接于pBluescript Ⅱ SK(+)载体上,将重组质粒转化E.coli HST08,得到黑曲霉的初级cDNA文库.利用难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的克隆子,测序并利用Blast分析基因序列.在难溶磷液体培养基中,进行克隆子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸实验.[结果]成功构建了黑曲霉H1的cDNA文库,其初级库容量约为5.65×106cfu/mL,重组率约为99.15％；通过难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的克隆子61个,其中克隆子H-54的cDNA序列长839 bp,基因编码氨基酸残基序列长179n.t.克隆子E.coli HST08 H-54在液体难溶磷培养基中培养,提高了有机酸的表达量,并增加了有机酸的种类,在培养12h后,溶液中开始产生甲酸和乙酸,在24 h后,溶液中产生苹果酸和α-酮戊二酸,培养36 h,溶液pH值由6.32降到3.93,可溶磷含量达到0.105 mg/mL.[结论]从黑曲霉H1中获得1个溶磷相关基因,将其命名为psgA.

关键词：黑曲霉、cDNA文库、基因psgA、有机酸

所属期刊栏目：52

分类号：Q933(微生物学)

在线出版日期：2012-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：311-317