藤黄微球菌Rpf活性蛋白的制取及其对红球菌VBNC菌体的复苏作用

摘要：

[目的]克隆藤黄微球菌Micrococcus luteus IAM 14879(=NCIMB 13267)的复苏促进因子Rpf(resuscitation promoting factor)的基因,在大肠杆菌中表达获取基因重组蛋白,考察对近缘高GC革兰氏阳性菌红球菌Rhodococcus sp.DS471活的非可培养VBNC (viable but non-culturable)菌体的复苏促进生长能力.[方法]抽提制备藤黄微球菌的DNA,确定rpf基因引物进行PCR扩增,利用pET15b质粒载体并转化大肠杆菌DE3表达,以SDS-PAGE检验获取纯化重组蛋白；在培养基中添加Rpf,以MPN (most probable number)法计数、评价对VBNC状态菌体的复苏促进生长效果.[结果]基因测序证实获得藤黄微球菌的rpf基因并在大肠杆菌中表达；SDS-PAGE分析表明获得rpf基因的重组蛋白；该蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有近100倍的复苏促进生长能力.[结论]成功克隆了藤黄微球菌的rpf基因,在大肠杆菌中获得了表达,表明了Rpf蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有复苏促进生长效果.

关键词：藤黄微球菌、Rpf、克隆与表达、VBNC、红球菌

所属期刊栏目：52

分类号：Q936(微生物学)

资助基金：浙江省钱江人才计划2011R10031;浙江师范大学教授科研基金ZC304009160

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：77-82