Streptomyces rimosus M4018中氧化应激转录抑制因子Rex的克隆表达及与rex操纵子的体外结合活性

摘要：

[目的]为了研究龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M4018中的rex基因对自身rex operator(ROP)的调控机制.[方法]根据天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中rex基因的同源序列设计引物进行PCR,从S.rimosus M4018中获得其rex基因(Sr-rex).同时,通过染色体步移的方法,获得其上游的ROP序列.采用体外凝胶迁移的方法,分析了Sr-Rex对ROP的调控作用.[结果]获取的Sr - rex基因核苷酸序列长度为846 bp,预测的编码氨基酸序列与S.coelicolor A3(2)中Rex的同源性为84％,获得GenBank登录号:GQ849479.圆二色光谱显示Sr-Rex的结构以α螺旋和β折叠为主,与软件预测相符.凝胶迁移实验表明,Sr-Rex能与S.rimosus M4108中扩增到的ROP片段特异性结合.同时,以Rex:ROP的最小结合序列为基础,设计了一条22 bp的单链DNA片段,和Sr-Rex的最大结合摩尔浓度比约为5:1.高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响.[结论]在S.rimosus M4108中,Rex是通过响应胞内NAD(H)水平的方式来调控ROP的表达的.

关键词：龟裂链霉菌、氧化应激、转录抑制因子Rex、基因克隆和表达、凝胶迁移分析

所属期刊栏目：52

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家重点实验室开放课题经费2060204;国家"863计划"2007 BAI26B02

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：38-43