高产紫杉醇菌株的诱变选育及其差异表达基因消减cDNA文库的构建
[目的]选育高产紫杉醇菌株,并构建选育到的高产紫杉醇菌株与出发菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库.[方法]分别采用硫酸二乙酯和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理菌株HD1-3孢子;以选育到的高产紫杉醇菌株为tester,菌株HD1-3为driver,应用抑制性消减杂交技术构建选育到的高产紫杉醇菌株与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库.[结果]试验确定的Nodulisporium sylviforme紫杉醇产生菌HD1-3孢子复合诱变的适宜条件为:将106cfu/mL孢子悬液经过8%硫酸二乙酯处理15 min后,在电磁搅拌下,用紫外灯(30 w,距离30 cm)照射处理45 s,获得了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇的突变株--UD14-11,其紫杉醇产量从出发菌株HD1-3的232.73±4.61μg/L提高至312.81±7.51μg/L;构建的文库滴度为1.2×107cfu/mL,阳性克隆率75.3%,片段大小主要集中在300 bp-1.0kb.[结论]选育到了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇突变株;成功地构建了高产紫杉醇菌株UD14-11与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库,为寻找、分离微生物生物合成紫杉醇相关基因和利用基因工程或代谢工程手段定向设计改造菌株奠定基础.
紫杉醇、内生真菌、诱变育种、抑制性消减杂交、cDNA文库
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Q933(微生物学)
国家自然科学基金项目30970090;中国博士后科学基金项目20090450136;哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目2010RFQXS043:黑龙江省普通高等学校新世纪优秀人才培养计划1251-NCET-005;黑龙江省教育厅科学技术研究项目11551377;黑龙江大学高层次人才创新团队支持计划hdtd2010-17
2011-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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