甘油脱氢酶基因在大肠杆菌中的密码子优化表达

摘要：

[目的]利用密码子优化技术,提高甘油脱氢酶基因gldA在大肠杆菌中的表达水平.[方法]针对gldA起始密码子下游区域,优先选择AT含量最高的同义密码子,从而在不改变氨基酸序列的前提下,提高该区域的AT含量.利用大引物PCR的方法对野生型gldA-WT进行定点突变,获得优化型基因gldA-4,与pET-32a(+)连接后,构建表达质粒pET-gldA-4,转入E.coli BL21(DE3),得到工程菌E.coli-4.同时,设定包含gldA-WT的工程菌E.coli-WT作为对照,摇瓶发酵后,以甘油为底物检测比较表达产物的酶活力.[结果]gldA_4相对gldA-WT而言,改变了第2、5、6位密码子中的4个碱基,AT含量从53.3%提高到80.0%.相应地,E.coli-4的粗酶液的酶活力为191.3 U/mL,比 E.coli-WT的48.3 U/mL提高了3倍多.[结论]本优化方案简便、快捷,但可明显提高甘油脱氢酶的酶活力,有望成为改善目的基因异源表达水平的一种通用方法.

关键词：甘油脱氢酶、AT含量、异源表达、密码子优化、大肠杆菌

所属期刊栏目：51

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然辩学基金21076172;30770059;福建省高校产学合作科技重大项目2010H6023

在线出版日期：2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：504-509