不吸水链霉菌ZB01cyp107z基因的克隆及原核表达纯化

摘要：

[目的]克隆不吸水链霉菌ZB01中的cyp107z基因,在E.coli中异源表达纯化,测定重组酶蛋白的酶动力学参数,为该基因的进一步研究奠定基础.[方法]根据cyp基因保守区序列设计引物,扩增不吸水链霉菌ZB01基因组中cyp107z基因的部分序列,通过染色体步移技术获取全长基因.利用pET28a表达载体构建该基因原核表达载体并于E.coli中诱导表达,以Ni-NTA亲和层析纯化表达出的重组蛋白.以阿维菌素为底物,构建重组蛋白体外催化体系,通过测定体系中NADPH的消耗,计算重组蛋白催化阿维菌素反应的酶动力学参数.[结果]从不吸水链霉菌ZB01基因组扩增出一条cyp107z基因同源基因,全长1290 bp,编码429个氨基酸残基,命名为cyp107z13,在E.coli中诱导表达了该重组酶蛋白,纯化后的重组酶蛋白催化阿维菌素的Km值为1.4 μmol/L,Vmax为0.041 μmol/min·mg,kcat为0.033 s-1.[结论]从不吸水链霉菌ZB01中克隆到cyp107z13基因,异源表达的CYP107Z13重组蛋白能够催化以阿维菌素为底物的氧化反应.

关键词：不吸水链霉菌、cyp107z13、基因克隆、原核表达、阿维菌素

所属期刊栏目：51

分类号：Q936(微生物学)

资助基金：植物病虫害生物学国家重点实验室开放课题2006PD5

在线出版日期：2011-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：410-416