紫云英AD-cDNA文库构建及与豆血红蛋白Lb相互作用靶蛋白的筛选

摘要：

[目的]本文旨在构建紫云英酵母双杂交AD-cDNA文库和互作靶蛋白筛选平台,为深入研究共生固氮作用的分子机理奠定工作基础.[方法]以接种华癸中慢生根瘤菌7653R的豆科植物紫云英不同时期根部组织为材料,抽提和纯化RNA,构建了一个酵母AD-cDNA文库.库容量达到1.02×106/3μg pGADT7-Rec DNA,插入片段大小1-1.5 kb左右.以紫云英豆血红蛋白基因AsB2510构建诱饵载体pGBKT7-AsB2510,利用酵母双杂交技术,筛选与诱饵蛋白相互作用的靶蛋白.[结果]在含有X-gal的SD四缺培养基上筛选得到26个克隆,经过质粒抽提、PCR鉴定、回转酵母验证获得10个阳性克隆.[结论]对阳性克隆的外源片段进行了测序和同源性分析,发现一个值得深入研究的含有tify domain和Divergent CCT motif的转录调控因子.

关键词：紫云英、华癸中慢生根瘤菌7653R、AD-cDNA文库、酵母双杂交、AsB2510、互作蛋白

所属期刊栏目：50

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家"973项目2010CB126500

在线出版日期：2011-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1607-1612