斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆、表达与启动子活性分析
[目的]研究斜纹夜蛾核型多角体病毒II ORF146基因的结构与功能.[方法]根据SpltMNPV IIORF146基因序列设计引物,经PCR扩增克隆ORF146基因.在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析.构建ORF146片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体.[结果]核苷酸序列分析表明,读码框含1383 bp,编码460个氨基酸的蛋白质,推定分子量为50.4 kDa.启动子活性分析和转录时相分析都表明该基因是个早、晚期都表达的基因,在病毒感染8 h和18 h有两个转录峰,24 h以后转录水平略有下降,但趋于稳定.pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高,效价可达1:3200以上.[结论]SpltMNPV Ⅱ ORF146基因是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因.推测ORF146基因可能与SpltMNPV Ⅱ病毒感染宿主细胞后病毒DNA复制有关.制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能.
斜纹夜蛾、核型多角体病毒、ORF146基因、原核表达、多克隆抗体
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Q933(微生物学)
国家自然科学基金30770279;苏州市科技支撑计划项目SNG0924
2011-03-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
1600-1606