北京棒杆菌转酮酶:基因克隆、序列分析与表达
[目的]转酮酶是非氧化磷酸戊糖途径中的关键酶.从北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense PD-67)中克隆转酮酶(transketolase,EC 2.2.1.1,TK)基因,并将转酮酶基因在C.pekinense PD-67中进行表达,研究增加转酮酶活性对C.pekinense PD-67生理特性的影响.[方法]分别以C.pekinense野生株AS1.299和突变株PD-67的基因组为模板,用PCR方法扩增tkt的全基因序列和前端控制序列;通过pAK6载体提高tkt基因在C.pekinense PD-67中的拷贝数,从而提高C.pekinense PD-67中转酮酶的活性.[结果]tkt基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与结构分析结果表明,C.pekinense突变株PD-67与野生株AS1.299相比较,二者调控序列及结构基因核苷酸序列完全一致.与谷氨酸棒杆菌ATCC 13032相比较,突变株PD-67的氨基酸序列有5个氨基酸差异,其中4个位于与辅因子硫胺素焦磷酸结合的结构域内.突变株PD-67来源的tkt基因在北京棒杆菌PD-67中得到了表达,重组菌转酮酶比活力比对照菌株提高了2倍.C.pekinense PD-67(pTK3)与对照菌株PD-67(pAK6)相比,生长加快,L-色氨酸的最终积累量也较高.[结论]本工作从C.pekinense 1.299和PD-67中克隆到tkt基因,并实现tkt基因的同源表达.适当提高菌株转酮酶活力,有助于菌体生长和色氨酸积累.
北京棒杆菌、转酮酶、非氧化磷酸戊糖途径、L-色氨酸
50
Q933(微生物学)
2010-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1474-1480
