大肠杆菌pqqL基因敲除与功能分析

摘要：

[目的]通过构建大肠杆菌pqqL基因缺陷突变株,研究大肠杆菌pqqL基因的功能.[方法]首先通过PCR扩增得到pqqL基因和kan抗性基因,在体外构建线性打靶片段pqqL-kan-pqqL.然后通过Red同源重组敲除大肠杆菌的pqqL基因,构建大肠杆菌缺失突变体DH5αΔpqqL.在此基础上通过DCIP法检测山梨糖脱氢酶活性来比较大肠杆菌突变株与亲本株中PQQ合成的情况.[结果]成功敲除了大肠杆菌的pqqL基因,DCIP法检测结果显示大肠杆菌pBCP162/DH5αΔpqqL和pMD19T Simple-pqqABCDE/DH5α能够合成PQQ,而大肠杆菌pMD19T Simple-pqqABCDE/DH5αΔpqqL不能合成PQQ.[结论]大肠杆菌pqqL基因和pqqF基因具有同样的功能.

关键词：吡咯喹啉醌、Red 同源重组、基因敲除

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分类号：S811.6(普通畜牧学)

资助基金：国家"863计划"2006AA020303;国家科技支撑计划项目2007BAI46B01

在线出版日期：2010-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1380-1384