解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达
[目的]克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达.[方法]通过PCR扩增Y. lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pGAP9K上,电转至P.pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵,以对硝基苯酚酯为底物检测脂肪酶水解活力,并对表达产物进行酶学性质分析.[结果]从Y. lipolytica中成功克隆了脂肪酶基因lip1(GenBank:Z50020),全长1461 bp,编码486个氨基酸残基,无内含子,无信号肽;密码子优化后基因表达水平相对于出发基因有较大提高,且组成型表达优于诱导型;Lip1酶学性质分析表明,其最适底物为pNPB(C4),45℃下Tris-Hcl缓冲液pH8.5时最大水解酶活为8.07 U/mL.[结论]Y. lipolytica脂肪酶基因lip1的克隆丰富了脂肪酶基因资源,其高效基因工程菌的构建为将来实现规模化生产奠定了技术基础.
解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1、克隆、密码子优化、GAP启动子、功能表达
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Q93(微生物学)
国家"863计划"2006AA020203;2007AA05Z417;2007AA100703;2009AA03Z232;教育部新世纪人才基金NCET 07 0336;湖北省自然科学基金2008CDB359;2009CDA046
2010-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
970-975
